甜蜜素化學(xué)名稱為環(huán)己基氨基磺酸鈉，于1937年發(fā)現(xiàn)，1950年開始生產(chǎn)應(yīng)用。它是由環(huán)己胺和***或氨基磺酸或三氧化硫反應(yīng)后用NaOH處理，再重結(jié)晶制得的一種白色結(jié)晶粉末，在高甜度甜味劑中，甜度是*低的，甜度為蔗糖的30～80倍。風(fēng)味較自然，后苦不明顯，熱穩(wěn)定性高，是不被人體吸收的低熱能甜味劑。1969年曾因其致畸性的報(bào)道而被世界各國禁用，后來由于大量試驗(yàn)表明它并無致畸、致癌等作用，許多國家重又許可使用。我國于1987年開始應(yīng)用甜蜜素，它是目前我國食品行業(yè)中應(yīng)用*多的一種甜味劑。甜蜜素含量檢測(cè)目前有氣相色譜檢測(cè)方法和液相色譜檢測(cè)方法等。*經(jīng)典的方法是GB/T5009.97-2003《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測(cè)定》。但該方法是外標(biāo)法，且用的是不銹鋼填充柱，在沒有自動(dòng)進(jìn)樣器的條件下，要想定量準(zhǔn)確，需要花很長(zhǎng)時(shí)間。要準(zhǔn)確地確定一個(gè)樣品的甜蜜素含量，上機(jī)部分至少需要15-～20分鐘(要求：進(jìn)樣水平非常高的人)，而用內(nèi)標(biāo)法只需5～10分鐘(要求：一般操作者)。
　　
　　本文采用在提取溶劑正己烷中加入兩種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)(甲苯和乙酸正丁酯)對(duì)甜蜜素經(jīng)過衍生后的產(chǎn)物進(jìn)行定量。
　　
　　1.試驗(yàn)部分
　　
　　1.1原理
　　
　　在硫酸介質(zhì)中甜蜜素與亞硝酸鈉反應(yīng)，生成環(huán)己醇亞硝酸酯，利用氣相色譜法進(jìn)行定性和定量。
　　
　　1.2試劑(所用試劑不做說明皆為分析純，水為蒸餾水)
　　
　　1.2.1甜蜜素儲(chǔ)備溶液：稱取1.0000g甜蜜素(含量≥99.0%)，加水溶解并定容至100mL，此溶液濃度為10.00mg/mL，為儲(chǔ)備液。置于4℃的冰箱中。本次試驗(yàn)溶液濃度為：10.320mg/mL
　　
　　1.2.2甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：取1.2.1儲(chǔ)備液10mL，加水定容至100mL，為使用液，濃度為1.0000mg/mL。本次試驗(yàn)使用溶液濃度為：1.0320mg/mL
　　
　　1.2.3100g/L硫酸溶液：稱取50g濃硫酸，用水定容至500mL。
　　
　　1.2.450g/L亞硝酸鈉溶液：稱取25g亞硝酸鈉，用水定容至500mL。
　　
　　1.2.5正己烷
　　
　　1.2.6甲苯(內(nèi)標(biāo))
　　
　　1.2.7乙酸丁酯(內(nèi)標(biāo))
　　
　　1.2.8氯化鈉
　　
　　1.3儀器
　　
　　1.3.1島津GC-14C氣相色譜儀(帶FID檢測(cè)器、毛細(xì)管進(jìn)樣口、N2000色譜工作站)
　　
　　1.3.2DB-5毛細(xì)管柱(30m×0.32mm×0.25μm)或其它類型毛細(xì)管柱，如DB-1、DB-1701
　　
　　1.3.3離心機(jī)
　　
　　1.3.410μL微量進(jìn)樣器
　　
　　1.4儀器操作條件
　　
　　1.4.1檢測(cè)器：200℃
　　
　　1.4.2汽化室：180℃
　　
　　1.4.3柱溫：70℃
　　
　　1.4.4載氣流速(壓力)：100kPa
　　
　　1.4.5氫氣流速(壓力)：50kPa
　　
　　1.4.6空氣流速(壓力)：60kPa
　　
　　1.5樣品前處理
　　
　　1.5.1內(nèi)標(biāo)溶液的配置：在正己烷中加入一定量的內(nèi)標(biāo)(乙酸丁酯和甲苯)1，加入的量以出色譜峰合適為宜。一般為500mL正己烷中加入內(nèi)標(biāo)100μL～200μL。本次實(shí)驗(yàn)乙酸丁酯的濃度為0.1344mg/mL(稱量0.0672g乙酸丁酯于裝有10mL左右正己烷的25mL容量瓶中，再將溶液轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中并定容至刻度線，搖勻，備用。
　　
　　1.5.2標(biāo)準(zhǔn)溶液前處理：吸取1.2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液10mL于50mL比色管中，加10mL水，搖勻，置于冰浴中。加入5mL50g/L亞硝酸鈉溶液，5mL100g/L硫酸溶液，在冰浴中放置30min，并時(shí)常搖動(dòng)，然后準(zhǔn)確加入10mL1.5.1溶劑，5g氯化鈉，搖勻后振搖80次。靜置分層。吸出正己烷層于10mL帶塞離心管中進(jìn)行離心分層(如有機(jī)溶劑和水相很快就有分層或只要進(jìn)樣針能吸出提取的溶劑，就可以不需離心分離這一步驟)，吸取正己烷層1μL注入色譜儀進(jìn)行分析。算出校正因子2。
　　
　　1.5.3液體樣品前處理：稱取試樣20.0g于50mL帶塞比色管中，加10mL水。搖勻，置于冰浴中。處理過程同標(biāo)準(zhǔn)溶液前處理1.5.2。吸取正己烷層試樣1μL注入色譜儀進(jìn)行分析。
　　
　　1.5.4固體樣品前處理：稱取已磨碎(剪碎)試樣2.0～10.0g(根據(jù)樣品中甜蜜素含量而定稱取質(zhì)量，使甜蜜素的量在1～10mg之間)于50mL帶塞比色管中，加10mL水。一些樣品不易溶解，如蜜餞類、山楂等，置于水浴鍋中煮沸15min左右，冷卻至60℃以下，置于冰浴中。處理過程同標(biāo)準(zhǔn)溶液前處理1.5.2。吸取正己烷層試樣1μL注入色譜儀進(jìn)行分析。
　　
　　2結(jié)果與討論
　　
　　2.1.1分析方法的線性相關(guān)性的測(cè)定
　　
　　分別吸取1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL、3mL、5mL、10mL、20mL于5個(gè)100mL容量瓶中，并定容至刻度，配成濃度分別為0.1032mg/mL、0.3096mg/mL、0.5160mg/mL、1.0320mg/mL、2.0640mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取以上標(biāo)準(zhǔn)溶液10mL于5支50mL比色管中，按1.5.2方法進(jìn)行處理。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)分別進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣1μL，以甜蜜素與內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比為橫坐標(biāo)，甜蜜素與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比(取五次進(jìn)樣平均值)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程為y=0.43991x-0.00088，其線性相關(guān)系數(shù)為0.99999。(見表1)
　　
　　由表1求出相對(duì)校正因子及其平均值，結(jié)果列于表2
　　
　　2.1.2分析方法的準(zhǔn)確度的測(cè)定
　　
　　從市場(chǎng)上購買一種不含甜蜜素的飲料(樣品名稱：鮮橙多橙汁飲料生產(chǎn)單位：昆山統(tǒng)一企業(yè)食品有限公司凈含量：2L生產(chǎn)日期：20060307)，稱取5份一定量的試樣，用移液管分別加入1.2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液1、3、5、10、15mL，按上述氣相色譜操作條件測(cè)定甜蜜素回收率，結(jié)果都在99.7%～101.1%之間。準(zhǔn)確度試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表3。
　　
　　2.1.3分析方法的精密度的測(cè)定
　　
　　從市場(chǎng)上購買一種含有甜蜜素的飲料(樣品名稱：鮮橙多生產(chǎn)單位：康裕食品有限公司凈含量：1.5L生產(chǎn)日期：20060415)，從同一產(chǎn)品中稱取五個(gè)試樣。按1.5.2方法進(jìn)行處理后，按上述氣相色譜操作條件測(cè)定甜蜜素含量，得到標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0027，變異系數(shù)(RSD)為0.55%。精密度試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表4。
　　
　　3結(jié)論
　　
　　綜上所述，本方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，具有較高的準(zhǔn)確度、精密度和回收率，線性關(guān)系好，是一種非?？尚械姆治龇椒?。
　　
　　注：1用甲苯和乙酸丁酯做內(nèi)標(biāo)都可以，可同時(shí)加入兩種內(nèi)標(biāo)(選其中一種作為參照計(jì)算)，也可以只加其中一種。本次試驗(yàn)的數(shù)據(jù)是以乙酸丁酯為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行計(jì)算而獲得的。
　　
　　2甜蜜素用本方法衍生處理后，在毛細(xì)管柱上會(huì)出兩個(gè)峰，一般是剛開始前面的大，后面的很小，但時(shí)間長(zhǎng)了，后面的峰越來越大，相應(yīng)的，前面的峰越來越小直至消失，但兩個(gè)峰面積和是不變的(48小時(shí)之內(nèi))。計(jì)算校正因子時(shí)，用甜蜜素衍生產(chǎn)物的兩個(gè)峰的面積和計(jì)算。檢測(cè)樣品時(shí)，兩個(gè)峰可單獨(dú)識(shí)別并采用同一個(gè)校正因子計(jì)算，結(jié)果相加，也可以使用工作站將峰面積相加，再計(jì)算含量。一批樣品檢測(cè)，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品使用同一濃度的內(nèi)標(biāo)溶劑，在計(jì)算校正因子時(shí)，可將內(nèi)標(biāo)物的量假定為1(任一定值皆可)，使用非常方便，不需知道加入的內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量。否則，要稱量?jī)?nèi)標(biāo)物的質(zhì)量，**至0.0001g，再定容至一定體積。算出內(nèi)標(biāo)物濃度，再進(jìn)行校正因子的計(jì)算。