摘要：黃芪甲苷可改善心肺功能，加強(qiáng)心臟收縮力，擴(kuò)張血管，降低血壓，改善皮膚血液循環(huán)和營養(yǎng)狀況;并能保護(hù)肝臟，防止肝糖元減少，對慢性活動性肝炎，有良好作用。
目的建立熒光分析法測定黃芪藥材中黃芪甲苷的含量方法。方法利用大茴香酸在硫酸介質(zhì)中與黃芪甲苷反應(yīng)產(chǎn)生強(qiáng)烈熒光的特性進(jìn)行測定黃芪中黃芪甲苷含量。結(jié)果*大激發(fā)波長Ex為320nm，*大發(fā)射波長Em為387nm。測定樣品的平均回收率為97.22%，RSD=2.31%(n=5)。結(jié)論該方法靈敏度高，選擇性好，結(jié)果無干擾，可廣泛應(yīng)用于黃芪藥材的質(zhì)量控制。
黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch．)Bge．var．mongholicu(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪A．membranaceus(Fisch．)Bge的干燥根，具有補(bǔ)氣固表、**脫毒，排膿，斂瘡生肌等功效［1］。黃芪為常用中藥，在中藥制劑中以黃芪為君藥的產(chǎn)品非常多，因此如何控制黃芪的質(zhì)量至關(guān)重要。黃芪甲苷是黃芪主要有效成分之一，也是黃芪皂苷中具有代表性的單體，在抗衰老、調(diào)節(jié)**功能、保護(hù)心肌和大腦缺血等多方面具有顯著作用［2］。黃芪甲苷僅在200nm處有末端吸收，對HPLC色譜法紫外檢測器檢測不利，噪音對結(jié)果影響較大，靈敏度也較低［3］。2005年版《中國藥典》采用蒸發(fā)光散射檢測器測定，具有分離度好，應(yīng)用范圍寬，流動相無干擾等優(yōu)點，但操作繁瑣，價格昂貴，不利于制藥公司及基層醫(yī)療單位普及。本文根據(jù)濃硫酸條件下黃芪甲苷與大茴香酸反應(yīng)產(chǎn)物具有熒光的特性，采用熒光分光光度法測定不同產(chǎn)地、不同生長年限黃芪藥材中黃芪甲苷的含量［4］，以期為黃芪的質(zhì)量控制提供客觀的定量評價依據(jù)。
1儀器與試藥
PerkinElmerinstrumentsLS45LuminesenceSpectrometer(美國PerkinElmer公司LS45型熒光分光光度計)，HX-200A型高速中藥粉碎機(jī)，萬分之一電子天平FA/JA1004型。72%的硫酸溶液，2%大茴香酸的無水乙醇溶液，石油醚、氯仿、正丁醇(三者均為天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠產(chǎn)品)，甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心產(chǎn)品)，無水乙醇(天津市耀華化學(xué)試劑有限責(zé)任公司產(chǎn)品)，以上試劑均為分析純。
黃芪甲苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所(批號110781-200613)。黃芪藥材采集或購于山西，內(nèi)蒙兩省，經(jīng)山西中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定教研室牛燕珍副教授鑒定為蒙古黃芪。
2方法和結(jié)果
2.1對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品5mg置5ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，即得。
2.2供試品溶液的制備黃芪藥材用高速中藥粉碎機(jī)粉碎(細(xì)粉過60目篩)，精密稱定0.2g，水煎煮3次(40，30，20min)共1.5h，合并水煎液。分別用石油醚，氯仿，正丁醇萃取4次，每次萃取劑用量為水煎液體積的50%，合并正丁醇相，總體積為30ml，正丁醇相揮干，用甲醇溶解備用。測定時，移取供試品溶液1ml置10ml容量瓶中，加入2%大茴香酸溶液0.6ml，72%硫酸溶液0.8ml，60℃水浴中反應(yīng)20min，迅速冷卻后用無水乙醇定容至刻度，搖勻，在熒光分光光度計下測定熒光強(qiáng)度，黃芪甲苷反應(yīng)產(chǎn)物*大激發(fā)波長Ex=320nm，*大發(fā)射波長Em=387nm，同時測定無黃芪甲苷對照品的試劑空白的熒光強(qiáng)度。
2.3線性關(guān)系的考察精密量取對照品溶液(1.0mg·ml-1)10，25，50，75，80μl，照“2.2”項下制備方法操作，以對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，得回歸方程為Y=91.465X 5.7024，r=0.9997，結(jié)果表明黃芪甲苷在1.0～8.0μg·ml-1，其濃度與熒光強(qiáng)度呈良好的線性關(guān)系。
2.4精密度實驗精密量取同一供試品溶液，照“2.2”項下制備方法操作，連續(xù)6次測定其熒光強(qiáng)度，RSD為0.10%，表明儀器精密度良好。
2.5穩(wěn)定性實驗取同一對照品溶液，照“2.2”項下制備方法操作，分別在0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，6.0h檢測，測得黃芪甲苷熒光強(qiáng)度分別為308.2，308.5，303.3，304.7，304.1，302.9，289.1，RSD為2.15%，結(jié)果表明對照品溶液在室溫下放置6h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2.6重復(fù)性實驗取同一批藥材，精密稱取平行樣品6份，每份0.2g，照“2.2”項下制備方法操作，連續(xù)6次平行測定，RSD為1.41%，表明方法重復(fù)性良好。
2.7回收率實驗采取加樣回收法，精密稱取5份已知含量的同一批樣品0.2g，精密加入黃芪甲苷對照品溶液20μl(1.0mg·ml-1)，照“2.2”項下處理并測定。結(jié)果見表1。表1回收率實驗結(jié)果(略)
2.8樣品的含量測定取不同產(chǎn)地的黃芪藥粉各0.2g，精密稱定，照“2.2”項下處理并測定。測定結(jié)果見表2。表2不同產(chǎn)地不同生長年限黃芪藥材中黃芪甲苷含量比較(略)
由表2可以看出，不同產(chǎn)地的黃芪藥材生長年限對藥材中黃芪甲苷含量的影響是不同的,生長年限對黃芪藥材中黃芪甲苷含量的影響很有限，而產(chǎn)地對其影響則是主要的。由此說明，道地藥材對于中藥的質(zhì)量多么重要。從總體看，山西應(yīng)縣和內(nèi)蒙古固陽縣下濕壕鄉(xiāng)的黃芪藥材中黃芪甲苷含量*高；2年生的黃芪藥材中黃芪甲苷含量*高，5年生的*少。所以黃芪藥材以2年生為宜，不用栽培5年再采集藥用。
3討論
筆者對黃芪甲苷的提取方法和溶劑進(jìn)行了考察。比較煎煮法，回流法，超聲法提取3種方法，結(jié)果表明煎煮法提取含量*高，黃芪甲苷的熒光強(qiáng)度*強(qiáng)。同一提取方法，不同提取溶劑對黃芪甲苷的熒光強(qiáng)度有影響，顏色變化顯著。采用超聲法，分別用水，甲醇，正丁醇做提取溶劑，提取完畢后測定熒光強(qiáng)度，結(jié)果表明，水做提取溶劑時熒光強(qiáng)度*高，甲醇次之，正丁醇的熒光強(qiáng)度*低。由此可見，同一物質(zhì)在不同溶劑中其熒光光譜的形狀和強(qiáng)度都有差別，熒光波長隨著溶劑極性的增強(qiáng)而長移，熒光強(qiáng)度也增強(qiáng)。
黃芪中的主要化學(xué)成分包括皂苷類，黃酮類及多糖類等，由于黃芪所含成分復(fù)雜，對樣品純化要求很高，用正丁醇提取液經(jīng)5%碳酸氫鈉洗滌，可除去大量含酚羥基的成分如黃酮和其他酚性干擾物質(zhì)。有研究表明，采用KOH堿化，正丁醇提取，再用Na2HPO4溶液提取去雜質(zhì)，也可使測定結(jié)果符合分析要求?！吨袊幍洹?005版中黃芪藥材的制備方法較繁瑣且加入了氨試液，使黃芪甲苷的總量明顯增加。分析原因，用氨試液處理樣品的主要作用是將黃芪醇類皂苷酯氨解為黃芪甲苷，從而明顯增加藥材中黃芪甲苷含量［5］。此外，加同量的氨試液，不同的靜置時間，黃芪甲苷的轉(zhuǎn)化量也有差別。有研究表明，用氨試液處理，當(dāng)pH≥11，靜置時間為30min時，藥材中黃芪甲苷的含量*高［6］。由此可見，堿液類別不同，所起的作用也有差別，有待進(jìn)一步研究?？紤]到上述原因，本實驗中未加入氨試液洗滌，測定的是黃芪藥材中原有的黃芪甲苷含量，不包括任何轉(zhuǎn)化的黃芪甲苷含量
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